超微量分光光度計(jì)基于物質(zhì)對(duì)特定波長(zhǎng)光的吸收特性進(jìn)行定量分析,核心原理是當(dāng)光線通過(guò)待測(cè)樣品時(shí),其中的核酸、蛋白質(zhì)等分子會(huì)選擇性吸收特定波長(zhǎng)的光,未被吸收的光被檢測(cè)器接收并轉(zhuǎn)換為電信號(hào),通過(guò)朗伯-比爾定律計(jì)算樣品濃度。與傳統(tǒng)分光光度計(jì)相比,其創(chuàng)新點(diǎn)在于采用特殊光路設(shè)計(jì),僅需微量樣品即可完成檢測(cè),避免了傳統(tǒng)方法因稀釋或加樣量過(guò)多導(dǎo)致的誤差。
一、該儀器的工作流程圍繞光路系統(tǒng)與檢測(cè)模塊展開(kāi):
光源發(fā)射穩(wěn)定光線,經(jīng)過(guò)光學(xué)元件聚焦后射入樣品池,樣品中的目標(biāo)分子吸收特定波長(zhǎng)的能量,剩余透射光被高靈敏度檢測(cè)器捕獲。儀器通過(guò)對(duì)比空白對(duì)照與樣品的吸光度差異,自動(dòng)計(jì)算并顯示濃度值,部分設(shè)備還能同步評(píng)估樣品純度。
二、應(yīng)用中需掌握以下關(guān)鍵技巧:
??樣品制備??需確保樣品純凈無(wú)顆粒雜質(zhì),懸浮顆粒會(huì)散射光線導(dǎo)致吸光度異常升高,檢測(cè)前可短暫離心去除沉淀;??加樣規(guī)范??使用配套的樣品臺(tái)或芯片時(shí),需將微量液體均勻覆蓋檢測(cè)區(qū)域,避免氣泡或液體不足影響光路傳輸;??空白對(duì)照設(shè)置??每次檢測(cè)前需用與樣品同源的緩沖液作為參比,校正背景干擾;??結(jié)果解讀??除濃度數(shù)值外,需結(jié)合純度指標(biāo)判斷樣品質(zhì)量。
此外,檢測(cè)不同類型分子時(shí)需切換對(duì)應(yīng)光源模式,并避免反復(fù)使用同一檢測(cè)區(qū)域?qū)е陆徊嫖廴?。通過(guò)規(guī)范操作與結(jié)果綜合分析,超微量分光光度計(jì)可在核酸提取、蛋白定量等實(shí)驗(yàn)中快速提供可靠數(shù)據(jù),提升實(shí)驗(yàn)效率。